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芽孢染色液

实验原理：
芽孢壁厚，透性低，着色、脱色困难，利用着色力强的染色剂在加热条件下染色时，染料同时进入菌体和芽孢。进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液染色后，芽孢仍然保留初染剂的颜色，而菌体被染成复染液的颜色，即菌体和芽孢分别被染成红色和绿色来区分。

操作步骤：
1. 取一个载玻片，在其中央滴一滴去离子水，用接种环蘸取少量菌体于去离子水中，涂抹均匀，待干燥后，在火焰上过3次以固定；
2. 滴加3-4滴A液于已经固定的涂片上；
3. 用镊子夹住载玻片在火焰上持续加热6-8s（可续加染液以防其蒸干）；
4. 加热完毕待玻片冷却后，倾去染液，水洗至不再褪色为止；
5. 用B液复染1min，水洗至流出液无色。待玻片干燥后，转移至显微镜油镜下观察。

实验结果：
枯草芽孢杆菌的芽孢呈绿色，菌体呈红色。

注意事项：
1. 只有在加热条件下芽孢渗透性发生变化，才能将其染色；
2. 第3步，持续加热6-8s要使染液冒蒸汽但不能沸腾，并且不能蒸干。