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      铜绿假单胞菌菌落选择、验证及计数方法


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      初步分离出的菌落需进一步进行验证,根据结果进行计数。

      菌落的选择、验证和计数方法如下:

      1、产蓝色或绿色色素的菌落(P),挑选的可疑菌落全部进行绿脓菌素验证。

        这类菌落中的铜绿假单胞菌计数为:P cp/np d

        P———蓝色和绿色的菌落数;

        cp———绿脓菌素试验阳性的菌落数;

        np———进行绿脓菌素试验的蓝色和绿色菌落数;

        d———稀释因子。

      2、紫外灯照射下发荧光、非蓝色且非绿色菌落(F),需按比例补做乙酰胺肉汤试验和42℃生长试验。铜绿假单胞菌的试验结果下:显砖红色的为阳性,黄色为阴性,42℃能生长。

        这类菌落中的铜绿假单胞菌计数为:F cF / nF d

        F———发荧光、非蓝色且非绿色的菌落数;

        cF———产氨阳性且42℃生长的菌落数;

        nF———进行产氨和42℃生长试验的发荧光、非蓝色且非绿色的菌落数;

        d———稀释因子。

      3、紫外灯照射下不发荧光、红褐色菌落(R),按比例同时进行下面3种试验的验证:乙酰胺肉汤阳性、氧化酶试验阳性、金氏B阳性的菌落可确认为铜绿假单胞菌。

        这类菌落中的铜绿假单胞菌计数为:R cR / nR d

        R———不发荧光、红褐色的菌落数;

        c R———产氨、氧化酶、金氏 B 培养基上显荧光试验均呈阳性的红褐色菌落数;

        n R———进行产氨、氧化酶、金氏B培养基上显荧光试验的不发荧光、红褐色菌落数。

      4、其它颜色菌落,直接判断为非铜绿假单胞菌。

        上述三种确认的铜绿假单胞菌菌落的数目之和

        N = P cp / np d + F cF / nF d + R cR / nR d,即为每250 mL水样中的铜绿假单胞菌数量,结果以CFU/250mL 计,当d值为1,且N值为0时,可报告250mL水样中未检出铜绿假单胞菌。

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