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      克氏双糖铁琼脂的原理及使用方法

      许英俊
      录入时间:2018-7-17 9:31:01 来源:青岛龙8生物

      一、用途和原理:


       克氏双糖铁琼脂(Kligler Iron Agar)用于鉴别肠道菌发酵葡萄糖和乳糖,及产生硫化氢的生化反应。

      蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素、矿物质;乳糖、葡萄糖为可发酵糖类,其产酸时通过酚红指示剂测出,酸性呈黄色,碱性呈红色;硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢,与铁盐生成黑色硫化铁;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。


      二、使用方法:


       1、称取克氏双糖铁琼脂55g,加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装试管(装量宜多些),121℃高压灭菌15min,制成高层斜面,冷却后备用。

       2、挑取待检菌的新鲜培养物,穿刺接种混合克氏双糖铁琼脂斜面。接种时先在斜面划线,然后再穿刺底层。

       3、将试管放入培养箱内36±1℃培养18—24h。

       4、观察结果。观察斜面与底层的反应情况。


      三、质量控制:


       配成的培养基为红色,下列菌株接种后于36±1℃培养24h结果如下:

      菌名

      菌号

      生长情况

      斜面/底部

      产气

      产H2S

      大肠埃希氏菌

      ATCC25922

      良好

      A/A

      +

      -

      普通变形杆菌

      CMCC49027

      良好

      K/A

      -

      +

      鼠伤寒沙门氏菌

      ATCC14028

      良好

      K/A

      +

      +

        注:“A”为产酸,“K”为产碱。


      四、常见问题:


       (1)克氏双糖铁试验时间为什么要控制在18-24h?KIA时间长了会怎样,短了会怎样?

       答:时间短了细菌发酵不够充分,现象不明显。时间长了细菌发酵过度,因为KIA是利用酸碱指示剂显色的,时间长了自然会引起一些改变而影响判断,同时各种副反应也会造成很大影响。相对来说,时间稍微长一点儿影响不大,但不能长得太夸张。

      (2)MIU试验,为什么大肠埃希菌培养24h之后,培养基出现了气泡?志贺菌的培养基就没有?

       答:因为大肠埃希菌是产气的,而志贺菌不产气。


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       注:本文属龙8生物原创,未经允许不得转载。

       

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