前 言
本标准代替GB/T4789.6—2003《食品卫生微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》。
本标准与GB/T4789.6—2003相比,主要变化如下:
———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验”;
———增加了术语和定义、缩略语;
———增加了血清学试验中H 抗原鉴定;
———增加了PCR确认试验;
———增加了附录A;
———修改了设备和材料;
———修改了培养基和试剂;
———修改了检验程序;
———修改了血清学试验中致泻大肠埃希氏菌所包括的O 抗原群;
———删除了肠毒素试验。埃希氏菌。该菌无动力、不发生赖氨酸脱羧反应、不发酵乳糖,生化反应和抗原结构均近似痢疾志贺氏菌。侵入上皮细胞的关键基因是侵袭性质粒上的抗原编码基因及其调控基因,如ipaH 基因、ipaR 基因(又称为invE 基因)。

4 培养基和试剂
4.1 营养肉汤:见A.1。
4.2 肠道菌增菌肉汤:见A.2。
4.3 麦康凯琼脂(MAC):见A.3。
4.4 伊红美蓝琼脂(EMB):见A.4。
4.5 三糖铁(TSI)琼脂:见A.5。
4.6 蛋白胨水、靛基质试剂:见A.6。
4.7 半固体琼脂:见A.7。
4.8 尿素琼脂(pH7.2):见A.8。
4.9 氰化钾(KCN)培养基:见A.9。
4.10 氧化酶试剂:见A.10。
4.11 革兰氏染色液:见A.11。
4.12 BHI肉汤:见A.12。
4.13 福尔马林(含38%~40%甲醛)。
4.14 鉴定试剂盒。
4.15 大肠埃希氏菌诊断血清。
4.16 灭菌去离子水。
4.17 0.85%灭菌生理盐水。
4.18 TE(pH8.0):见A.13。
4.19 10×PCR反应缓冲液:见A.14。
4.20 25mmol/L MgCl2。
4.21 dNTPs:dATP、dTTP、dGTP、dCTP每种浓度为2.5mmol/L。
4.22 5U/LTaq酶。
4.23 引物。
4.24 50×TAE电泳缓冲液:见A.15。
4.25 琼脂糖。
4.26 溴化乙锭(EB)或其他核酸染料。
4.27 6×上样缓冲液:见A.16。
4.28 Marker:分子量包含100bp、200bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp、1000bp、1500bp条带。
4.29 致泻大肠埃希氏菌PCR试剂盒。

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