嗜热链球菌抑制法

原理：

  检样经过 80 ℃杀菌后，添加嗜热链球菌菌液。培养一段时间后，嗜热链球菌开始增殖。这时候加入代谢底物 TTC，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，嗜热链球菌将继续增殖，还原 TTC 成为红色物质。相反，如果样品中含有高于检测限的抑菌剂，则嗜热链球菌受到抑制，因此指示剂 TTC 不还原，保持原色。

检验程序：

  活化菌种：取一接种环嗜热链球菌菌种，接种在 9 mL 灭菌脱脂乳中，36 ℃±1 ℃培养 12 h～15h 后，置 2 ℃～5 ℃冰箱保存备用。每15 d 转种一次。

  测试菌液：将经过活化的嗜热链球菌菌种接种灭菌脱脂乳，36 ℃±1 ℃培养 15 h±1 h，加入相同体积的灭菌脱脂乳混匀稀释成为测试菌液。

  培养操作：取检样 9 mL，置 18 mm×180 mm 试管内，每份检样另外做一份平行样。同时再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管用 9 mL 青霉素 G 参照溶液，阴性对照管用灭菌脱脂乳 9 mL。所有装有样品的试管置 80 ℃水浴加热 5 min，冷却至 37 ℃以下，加入测试菌液1 mL，轻轻旋转试管混匀。36 ℃±1 ℃水浴培养 2 h，加 4％TTC 水溶液 0.3 mL，在旋涡混匀器上混合 15 s 或振动试管保证液体与样品混匀。36 ℃±1 ℃水浴避光培养 30 min，观察颜色变化。如果颜色没有变化，于水浴中继续避光培养 30 min 作最终观察。观察时要迅速，避免光照过久出现干扰。

  判断方法：在白色背景前观察，检样呈乳的原色时，指示乳中有抗生素存在，为阳性结果。检样呈红色为阴性结果。如最终观察现象仍为可疑，建议重新检测。

报告：

  最终观察时，检样变为红色，报告为抗生素残留阴性。检样依然呈乳的原色，报告为抗生素残留阳性。

  本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素0.004 IU，链霉素 0.5 IU，庆大霉素 0.4 IU，卡那霉素 5 IU。

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