紫外线灭菌
（一）目的要求
了解紫外线灭菌的原理和方法
（二）基本原理
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2）。O3和H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为宜。
此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以前；可在无菌室内(或接种箱内)喷洒3%～5%石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用2%～3%的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。
（三）器材
1．培养基 牛肉膏蛋白胨平板。
2．溶液或试剂 3%~5%石炭酸或2%~3%来苏尔溶液。
3．仪器或其他用具 紫外线灯。
（四）操作步骤
l．单用紫外线照射
（1）在无菌室内或在接种箱内打开紫外线灯开关，照射30min，将开关关闭。
（2）将牛肉膏蛋白胨平板盖打开15min，然后盖上皿盖。置37℃培养24h。共做三套。
   （3）检查每个平板上生长的菌落数。如果不超过4个，说明灭菌效果良好，否则，需延长照射时间或同时加强其他措施。
    2．化学消毒剂与紫外线照射结合使用
（1）在无菌室内，先喷洒3%～5%的石炭酸溶液，再用紫外线灯照射15imn。 
（2）无菌室内的桌面，凳子用2%～3%来苏尔擦洗，再打开紫外线灯照射15min。
    （3）检查灭菌效果[方法同“单用紫外线照射”(3)]。
    因紫外线对眼结膜及视神经有损伤作用，对皮肤有刺激作用，故不能直视紫外线灯光下工作。
（五）实验报告
1．结果
记录两种灭菌效果于下表中
处理方法 平板菌落数
1   2   3 灭菌效果比较
紫外线照射
3%～5%石炭酸+紫外线照射    
2%～3%来苏尔+紫外线照射    
 
2．思考题。
（1）细菌营养体细胞和细菌芽孢对紫外线和的抵抗力会一样吗，为什么？
（2）你知道紫外线灯管是用什么玻璃制作的？为什么不用普通灯用玻璃？
（3）在紫外灯下观察实验结果时，为什么要隔一块普通玻璃？
 
   

 

上一篇：下一篇：微孔滤膜过滤除菌