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      气象色谱法分析双歧杆菌的有机酸代谢产物



      录入时间:2014-12-12 11:52:34 来源:龙8生物

      双歧杆菌培养液制备

            挑取BBL琼脂上纯培养的双歧杆菌接种于PYG液体培养基,同时用未接种菌的PYG液体培养基做空白对照,绝对厌氧,36±1℃ 培养48±2 h。

      标准液配制

      乙酸标准溶液:准确吸取乙酸5.70ml 加水稀释至100.0ml,摇匀,附录B方法进行标定,配成约1.0 mol/L的乙酸标准溶液。乙酸使用液:将经标定的乙酸标准溶液用水稀释至20.0 mmol/L。

      乳酸标准溶液:准确吸取含量为85-90%的乳酸0.84 ml,加水稀释至100.0ml,摇匀,配成1.0 mol/L的乳酸标准溶液。乳酸使用液:将乳酸标准溶液用水稀释至20.0 mmol/L。

      乙酸的处理

             取双歧杆菌培养液2.0-3.0ml放入10ml离心管中,加入0.2ml 50%硫酸溶液,混匀,加入2.0ml丙酮,混匀后加过量氯化钠,剧烈振摇1min,再加入2.0ml乙醚,振摇1min后,于3000r/min离心5min,将上清液转入另一试管中,下层溶液用2.0ml丙酮和2.0ml乙醚重复提取2次,合并有机相,于40℃水浴中用氮气吹至少量溶液存在,用丙酮定容至1.0 ml,混匀后备用。同样操作步骤处理乙酸标准和空白培养液。

      乳酸的处理

               取双歧杆菌培养液2.0-3.0ml放入10比色管中,100℃水浴10min,加入0.2mL 50%硫酸溶液,混匀,加入1.0mL甲醇,于58℃水浴30min后加水1.0mL,加三氯甲烷1.0mL,振摇3min,3000r/min离心5min,取三氯甲烷层分析。同样操作步骤处理乳酸标准和空白培养液。

       


       

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