long8-龙8(国际)头号玩家唯一官方网站




      long8-龙8(国际)头号玩家唯一官方网站

      中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
      微生物技术资料
      文章检索
        首页 > 微生物检测方法和标准->微生物限度检查法——检查法

      微生物限度检查法——检查法



      录入时间:2008-10-20 11:47:52 来源:青岛龙8 

         
          1 、细菌、霉菌与酵母菌计数
          (1) 平皿菌落计数法  取均匀供试液,进一步稀释成1:10<2> 、1:10<3>等适宜的稀
      释度。分别取连续三级10倍稀释的供试液各1ml,置直径约90mm的平皿中,再注入约45℃
      的培养基约15ml,混匀,待凝固后,倒置培养,每稀释度应作2~3个平皿。
          细菌计数用营养琼脂培养基,霉菌计数用虎红琼脂培养基,酵母菌计数用酵母浸出
      粉胨葡萄糖琼脂培养基,合剂用虎红琼脂培养基与酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基。
          菌数测定空白对照试验  取供试验用的稀释剂各1ml,置4个无菌平皿中,分别按细
      菌、霉菌计数用的培养基制备平板、培养、检查,不得长菌。
          细菌培养时间为48小时,分别在24及48小时点计菌落数,一般以48小时菌落数为准。
      霉菌、酵母培养时间为72小时,分别在48及72小时点计菌落数,一般以72小时菌落数为
      准。
          营养琼脂平板一般点计细菌菌落数,虎红琼脂平板一般点计霉菌菌落数,在特殊情
      况下,前者同时点计霉菌、酵母菌菌落数,后者同时点计细菌菌落数。酵母浸出粉胨葡
      萄糖琼脂平板仅点计酵母菌菌落数。液体制剂同时点计霉菌菌落数及酵母菌菌落数。含
      蜂蜜及王浆的合剂的霉菌、酵母菌菌落数分别测定,合并计数。菌落如蔓延生长成片,
      不宜计数。
          点计后,计算各稀释级的平均菌落数,按菌数报告规则报告菌数。
          菌数报告规则  细菌宜选取平均菌落数在30~300之间的稀释级,霉菌宜选取平均菌
      落数在30~100之间的稀释级作为报告菌数计算的依据。如有1个稀释级在30~300(30~
      100)之间时,将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告;如同时有2个稀释级在30~300(30
      ~100)之间时,按下式计算两级比值。
                 高稀释级的平均菌落数×稀释倍数
          比值=────────────────
                 低稀释级的平均菌落数×稀释倍数
          当比值≤2时,以两稀释级的均值报告,当比值>2时,以低稀释级平均菌落数乘以
      稀释倍数报告;如同时有3个稀释级的平均菌落数均在30~300之间时,以后2个稀释级计
      算级间比值报告;如各稀释级的平均菌落数均不在30~300之间,以最接近30或300的稀
      释级平均菌落数乘以稀释倍数报告;如各稀释级平均菌落数均在300(100)以上,按最高
      稀释级菌落数乘以稀释倍数报告;如各稀释级平均菌落数均小于30时,一般按最低稀释
      级的菌落数乘以稀释倍数报告。如当1:10(或1:100 )稀释级平均菌落数等于或大于原
      液(或1:10稀释级)时,应以培养基稀释法测定,按测定结果报告菌数。
          (2) 培养基稀释法  取供试液(原液或1:10供试液)3份,每份各1ml,分别注入5个
      平皿内(每皿各0.2ml)。每1个平皿倾注营养琼脂培养基约15ml,混匀,凝固后,倒置
      培养,计数。每1ml注入的5个平板点计的菌落数之和,即为每1ml的菌落数,共得3组数
      据。以3份供试液菌落数的平均值乘以稀释倍数报告。
          如各稀释级平板均无菌落生长,或仅最低稀释级平均菌落数小于1时,则报告菌数为
      小于10个。
          
         2 、控制菌检查  除另有规定外,取供试液10ml(相当供试品1g、1ml 、10cm<2>),
      直接或处理后接种,经增菌分离培养后,进行革兰氏染色、生化试验与血清凝集试验项
      检查。
          (1) 大肠杆菌(Escherichia coli)  取胆盐乳糖培养基3份,每份各100ml,2份分别
      加入规定量的供试液,其中1份加入对照菌液作阳性对照,第3份加入与供试液等量的稀
      释剂作空白对照。培养18~24小时(必要可延至48小时)。空白对照应无菌生长。其余
      2份培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板,培养18~24小时。当阳性
      对照的平板呈阳性菌落时,供试品的平板无菌落生长,或有菌落但不同于表1所列的特征,
      可判为未检出大肠杆菌。
          表 1  大肠杆菌菌落形态特征
      ───────┬──────────────────
          培养基    │       菌  落  形  态
      ───────┼──────────────────
      曙红亚甲蓝琼脂│呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色,
                  │菌落中心深紫色或无明显暗色中心,圆
                  │形,稍凸起,边缘整齐,表面光滑,湿
                  │润,常有金属光泽。
      ───────┼──────────────────
       麦康凯琼脂 │鲜桃红色或微红色,菌落中心深桃红色,
                  │圆形,扁平,边缘整齐,表面光滑,湿润。
      ───────┴──────────────────
          如生长的菌落与表1所列特征相符或疑似者,应挑选2~3个菌落分别接种于营养琼脂
      培养基斜面,培养18小时,作以下检查:
          革兰氏染色  取上述斜面培养物,涂片,固定。以结晶紫染液染色1分钟,水洗,革
      兰氏碘液媒染1分钟,水洗,滤纸吸干余水。以乙醇脱色20~30秒钟,水洗。滴加沙黄染
      液复染1分钟,待干后镜检。
          乳糖发酵试验  取上述斜面培养物,接种于乳糖发酵管,培养24~48小时,观察产
      酸(培养基变色),产气(杜氏管内有气泡)。
          靛基质试验  取上述斜面培养物,接种于蛋白胨水培养基中,培养48±2小时,沿管
      壁加入对靛基质试液0.3~0.5ml,液面呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。
          甲基红试验  取上述斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中,培养48±2小
      时,于每1ml培养液中加入甲基红指示剂1滴,立即观察,呈鲜红色或桔红色为阳性,呈
      黄色为阴性。
          乙酰甲基甲醇生成试验(V-P 试验)  取上述斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨
      水培养基,培养48±2小时,于每2ml培养液中加入α-萘酚乙醇液1ml,混匀,再加40%
      氢氧化钾溶液0.4ml,充分振摇,出现红色为阳性。加试剂4小时内,如出现红色亦应判
      为阳性,无红色反应为阴性。
          枸橼酸盐利用试验  取上述斜面培养物,接种于枸橼酸盐培养基的斜面上,培养48
      ±2小时,培养基斜面有菌苔生长,培养基由绿色变为蓝色时为阳性,培养基颜色无改变
      时为阴性。
          当空白对照试验呈阴性,供试品检查为革兰氏阴性无芽孢杆菌;乳糖发酵产酸产气
      或产酸不产气;IMViC 试验为阳性、阳性、阴性、阴性或阴性、阳性、阴性、阴性,判
      为检出大肠杆菌。对可疑反应的菌株,应重新分离培养后,再作生化试验证实。

       

      上一篇:下一篇: 微生物限度检查法——检查法

      首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | 联系我们
      业务联系电话
         400-0532-596 0532-66087773
         0532-66087762 0532-81935169
      邮箱:qdhbywg@vip.126.com
      地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
      产品技术咨询
        工作日(周一至周六8:00-18:00):
        18562658263 13176865511
        其它时段:13105190021
      投诉与建议:13105190021 13006536294
      友情链接: