方法和取样量

定量检验是应用“三管”增菌法，检验和定量样品中极少量的阪崎肠杆菌（克罗诺杆菌属）。检验需 要333 g样品。

样品制备

取样前消毒样品包装的开启处和取样勺。无菌称取样品100 g,10 g和1 g各三份分别加人2 L, 250 mL和125 mL的样品稀释瓶中，加入9倍预热到45℃的灭菌蒸馏水（1 ： 10稀释），或者将样品直 接称量到装有9倍预热到45℃的灭菌蒸馏水的样品稀释瓶中，振摇使样品充分混匀，36℃±1℃培养18h~22h。

选择性增菌

分别移取培养18h~22h的悬液各1.0 mL加人9.0 mL克罗诺杆菌肉汤中，36℃ ± 1 °C培养 24 h±2 h，取1.0 mL灭菌生理盐水，加人9.0 mL克罗诺杆菌肉汤中作为空白对照。

初筛结果观察

将培养后的试管置于366 nm波长的UV灯下观察是否产生荧光，以空白样品作为对照。如果无 荧光产生，阪崎肠杆菌（克罗诺杆菌属）为阴性；如果产生荧光，则以下列步骤进行操作。

可疑菌分离

轻轻混匀增菌液，每份增菌液用3 mm接种环（10μL）分别接种2个克罗诺杆菌显色平板，三区法 或四区法划线，以得到单个菌落。将平板置36 ℃±1 ℃培养18 h〜22 h。

结果判别

观察平板上阪崎肠杆菌（克罗诺杆菌属）的典型形态。在克罗诺杆菌显色平板上为蓝绿色菌落，圆 形，直径1 mm〜2 mm。

可疑菌产黄色素试验

从显色平板上挑取1〜5个可疑菌落分别接种到TSA平板上，25℃±1℃培养48 h〜72 h。

可疑菌生化鉴定实验

从TSA平板上挑取黄色菌落，革兰氏染色，做氧化酶试验。革兰氏染色阴性，氧化酶试验阴性，应 用生化鉴定试剂或其他细菌鉴定系统进行鉴定。

上一篇：下一篇：阪崎肠杆菌（克罗诺杆菌属）定性检验