一、实验目的：

    学习酵母菌种的纯种分离技术

二、实验原理：

    关于纯种分离，在基础微生物学实验中已学过稀释分离法和划线分离法，这里不再重复。这两种方法虽然简单，但并不能保证分离所得种的纯度。而单细胞分离法因可用显微镜直接检查，其纯度能得到充分保证。

    林德奈单细胞分离法，即小滴培养法，是将酵母菌液充分稀释至每一小滴差不多含一个酵母细胞，然后在显微镜下确证只含一个细胞的小滴，经适当培养后，扩大保存。

三、实验器材与试剂：

显微镜，凹载玻片，计数板，盖玻片等。

四、实验步骤：

1. 取2块盖玻片，用分析天平称重（精确至0.1mg）后，在一块盖玻片（最好用血球计数板的盖玻片）上用毛细滴管滴上9滴酵母培养基，合上另一玻片，再称重，计算每滴培养基的体积。

2. 用计数板计数酵母菌，用培养基对其进行高倍稀释，稀释至每滴培养基中大致含一个酵母菌。

3. 在已灭菌的盖玻片上滴上酵母稀释液（每张玻片可滴9滴），放于已灭菌的凹载玻片上，显微镜下观察，找到只含一个酵母菌的小滴，做上记号。

4. 30℃培养一定时间后（应放于湿室中），用无菌滤纸片吸走标记的酵母菌，进行扩大培养和菌种保藏。

五、注意事项：因小滴易干，操作时动作要快，培养时要用湿室。

六、思考题：称重时为什么要用两块盖玻片？是否可以用微量移液器（如1微升）来代替称重？

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