一、真菌DNA的提取（方法一）
1.实验试剂
（1）DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS
（2）3M NaAc
（3）TE：10 mmol/L Tris-HCl pH8.0，1 mmol/L EDTA
（4）酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)
（5）氯仿:异戊醇(24:1)
（6）异丙醇
（7）无水乙醇
（8）75%乙醇
（9）RNaseA
2.实验步骤
（1）取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
（2）加入4mL提取液，快速振荡混匀
（3）加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本）
（4）1000rpm，4℃，5min
（5）上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000rpm，4℃离心5min）
（6）取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min
（7）用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干，重悬于500ul TE中
（8）加入1ul RNaseA （10mg/mL），37℃处理1h
（9）用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）
（10）取上清，1/10V 3M NaAc，2.5V体积的无水乙醇，-70℃沉淀30min以上
（11）沉淀用75%乙醇漂洗，风干，溶于200ul TE中，-20℃保存备用
上一篇：下一篇：真菌的DNA和RNA提取方法（2）
