一、目的要求 

1．学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法；

2．了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。

 

二、基本原理 

多管发酵法包括初（步）发酵试验、平板分离和复发酵试验。 

初（步）发酵试验：利用大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气的原理，但初发酵管24h内产酸产气和48h产酸产气的均需进行平板分离。

平板分离：采用伊红美蓝琼脂平板，使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。 

复发酵试验：以上阳性菌落，经染色为革兰氏阴性无芽孢菌者，再次进行初发酵试验，经24h培养产酸产气的，最终确定为大肠菌群阳性结果。

 

三、器材 

1、培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。

2、仪器或其他用具：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。

 

四、操作步骤 

1．水样的采取

2．自来水检查 

（1）初（步）发酵实验 

将水样分别接入三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）中，37℃培养24h，24h未产气的继续培养48h。

（2）平板分离

将经24h和48h培养后产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃培养18～24h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。

深紫黑色，有金属光泽； 

紫黑色，不带或略带金属光泽； 

淡紫红色，中心颜色较深。 

（3）复发酵试验

将镜检为革兰氏阴性无芽孢菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管（瓶）查表1，即得大肠菌群数。

3．池水、河水或湖水等的检查 

分别将100ml、10ml、1ml原水样和经稀释成10－1、10－2的水样重复上述自来水的检查，其中100、10、1、10－1ml水样的发酵结果查表2，10、1、10－1、10－2ml水样的发酵结果查表3，即得大肠菌群数。

 

五、思考题 

1．大肠菌群的定义是什么？

2．假如水中有大量的致病菌——霍乱弧菌，用多管发酵技术检查大肠菌群，能否得到阴性结果？为什么？

3．EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？

4．经检查，水样是否合乎饮用标准？