1. 预先制备H5基因表达细胞片.
2. 用PBS轻洗细胞一次.
3. 用预冷(-20oC) 的甲醇固定细胞20分钟.
4. 风干片子(此片可在低温长期保存待用).
5. 用PBS浸泡细胞片20分钟.
6. 吸去PBS, 加抗血清/抗体(稀释度可根据具体情况而定). 体积要足够盖过细胞表面.
7. 37oC 温箱45分钟到一个小时.间中摇动.
8. PBS 洗三次,每次15分钟,室温,摇动.
9. 吸去PBS,加第二抗体(抗人或抗禽,根据第一抗体而定), 稀释度1:100至1:200, 可根据第二抗体浓度而定. 体积要足够盖过细胞表面.
10. 37oC 温箱45分钟到一个小时, 间中摇动.
11. PBS 洗三次,每次15分钟,室温,摇动.
12. 吸去PBS,加覆盖液, 盖玻片,用指甲油封边.
13. 镜检.
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