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    细菌内毒素检查法检测注射用盐酸大观霉素中细菌内毒素的研究



    录入时间:2010-11-24 13:17:05 来源:维普数据库

     

    注射用盐酸大观霉素(Spectinmycin Hydrochliride for injection,SHI)又称淋必治,临床上主要用于淋球菌等感染,其内毒素检测现行标准采用家兔热原法(卫生部药品标准1994年),操作费时,成本高。美国药典1采用细菌内毒素检查法(简称内毒素法),国内尚未见报道采用此法。为此笔者考察了采用内毒素检查法的可行性并与家兔法进行了比较,结果满意,现报道如下。

    1 实验材料

      鲎试剂TAL(湛江安度斯生物有限公司,经灵敏度复核合格);细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所,批号9603,规格60EU/支);注射用盐酸大观霉素(普强苏州制药有限公司);细菌内毒素检查用水(简称水,湛江安度斯生物有限公司,内毒素含量<0.0015 EUml)。

    2 方法与结果

    2.1 SHI细菌内毒素限值(L)的确定
      SHI的热原剂量(M):M75 mgml、1mlkg,致热反应阈值(K)为5 EUkg,则LKM0.067 EUmg5.0 EUml(以75 mgml的溶液计)。
    2.2
     最大非抑制浓度测定
      将SHI用水配制成75 mgml的溶液,再作10、20、40、80、160倍稀释,得到样品的浓度系列记为Sw;另制备一同样浓度系列的样品溶液,但在制备时加入内毒素,使每一浓度的样品溶液中都含有0.25 EUml浓度的内毒素记此系列为SE。选用灵敏度λb0.125 EUmlTAL,分别与SWSE两个系列反应,结果(见表1)。表明SHI在上述稀释倍数时对内毒素检查均无抑制作用。

    1 最大非抑制浓度测定 TAL(批号960811Bλ0.125 EUml

    稀释倍数

    10

    20

    40

    80

    160

    SE

    ++

    ++

    ++

    ++

    ++

    SW

    --

    --

    --

    --

    --

     

    2.3 SHI的干扰试验
      取3批经热原检查合格的SHI,分别用水制成75 mgml的溶液后,再作40倍稀释,用这些样品液分别依法试验2,结果(见表2)。鲎试剂在水和SHI溶液中的灵敏度均在0.5λb2λb范围内,表明样品无干扰作用。

    2 干扰试验(λ0.125 EUml

     

    内毒素浓度
    EUml

    内毒素的水溶液

    内毒素+样品液

    样品1

    2

    3

    0.5

    ++++

    ++++

    ++++

    ++++

    0.25

    ++++

    ++++

    ++++

    ++++

    0.125

    ++++

    +++-

    +++-

    ++++

    0.06

    ----

    ----

    ----

    ----

    0.03

    ----

    ----

    ----

    ----

    灵敏度(λ

    0.125

    0.149

    0.149

    0.125

     

    2.4 家兔法与内毒素法的比较:家兔法的剂量见2.1项下,内毒素法取家兔法项下的溶液用水按140稀释,用λ0.125 EUmlTAL进行试验,共检测27批,结果两法全部合格,符合率100%。

    3 讨 论

    3.1 美国药典规定SHIL值为0.09 EUmg(是以SHI的净含量计),本文求出的L值为0.067 EUmg(是以SHI的重量计),经实际含量换算本文的L值为0.1 EUmg,二者基本一致。
    3.2
     试验表明,用内毒素法取代家兔热原法检测SHI细菌内毒素是可行的,且经济、简便、快速。

    作者单位:江苏省苏州市药品检验所

    参考文献
    1
     USP XXIII,19951434
    2
     中华人民共和国药典,二部附录,199576

     

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