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    《水生微生物实验法》——从泥样中分离放线菌



    录入时间:2010-9-13 13:55:01 来源:青岛龙8

     

    水中放线菌无论在数量上或在种类上都比其他的细菌少得多。但在水、沉积物及浮游生物中都能分离到放线菌,如Kpucc 从海泥及浮游生物中分离到灰色放线菌、球孢放线菌及直线白色放线菌等三种。在淡水中也有多种放线菌,如游动放线菌属等。

    1 .培养基成分及其制法

    ① 葡萄糖酵母膏牛肉膏蛋白胨琼脂   即埃默森氏培养基.葡萄糖、酵母膏可减至每升l 克,也可省去氯化钠。此培养基适用于放线菌的分离、其成分如下:

    葡萄糖10

    酵母膏10

    牛肉膏0.4

    蛋白胨4

    NaCl (用子淡水种)2.5

    琼脂15

    陈海水(用于咸水样品)

    或蒸馏水(用于淡水样品)1000毫升

    pH 7.2-7.4 , 121 蒸汽下灭菌30 分钟,制成平板,备用。具体制法参考高氏1 号培养基。

    ② 高氏(Gause )1号斜面培养基,此种培养基适于放线菌的纯化培养。其成分如下;

    淀粉(可溶性)20

    KNO3  1

    MgO2·7H2O   0.5

    FeSO4·7H2O   0.01

    K2HPO4   0.5

    NaCl 0.5

    琼脂20

    陈海水或蒸馏水1000毫升

    pH 7.2-7.4

    用少量水将淀粉调成糊状.取500 毫升煮沸水注入糊状淀粉中,边加边搅拌,使其溶解,除琼脂外,加入其他成分.溶解后加水至1000 毫升.加入琼脂,并使其溶化,调pH ,分装于试管,112 蒸汽下灭菌30 分钟,摆成斜面,备用.

    2 .分离步骤

    ① 按上法取10 泥样,溶解于90 毫升无菌海水或无菌水中.加10%10滴。边加边振荡,使酚及微生物分布均匀。酚在此能抑制细菌的生长。

    ② 以10倍稀释法将泥样冲稀至10-210-3的悬液.

    ③ 各取0.1毫升悬液放于淀粉铵平板培养基上.以弯曲玻棒涂匀,每个稀释度制2 个平板.

    ④ 倒放培养皿于25-30 下培养7-15 天.

    ⑤ 观察菌落特征,挑取所需菌落,接种于高氏1 号斜面培养基作纯化培养。

     

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