（十五）着色菌属或称红硫菌属的分离与纯化培养

着色细菌与绿菌属一样也是光合细菌，但它们除了含有叶绿素外，还含有胡罗卜素，而且后者占优势。其细胞除球形外．有柱状，偶有弯曲有荚膜及极生鞭毛，能运动，细胞团块呈深浅不一的红色或紫红色。在有硫化氢条件下生长时，能氧化硫化氢与硫，累积硫于细胞内，而绿色硫细菌却沉硫于细胞外。分布在有腐烂藻类植物的海泥和淡水泥中。

1 .分离培养基成分及其配制

由于此种完全培养基的有些成分不能在高压灭菌．或在高温下不相容必须先制备好基础培养基，然后把其他成分的无菌溶液加到冷基础培养基中。

（1）基础培养基

NH₄Cl    0.1 克

KH₂PO₄    0.1 克

MgCl₂    0.05克

NaCl   海生种30 克

淡水种10克

琼脂     20克

水    925毫升

溶解以上无机盐于水中，加入琼脂，加热至121℃ 15分钟，使琼脂溶解，分装于试管或螺旋口瓶里．121 ℃ 蒸汽下灭菌15分钟。不加琼脂可作为液体培养基。

（2）无菌碳酸氛钠溶液：将NaHCO3  5克加水至100 毫升，在121℃ 蒸汽下灭菌15 分钟。

（3）无菌硫化钠溶液：此液既作为HS^-的来源，又起脱氧剂作用，若是预先配制，必须把它保存在没有氧的密闭容器里，否则应在临用前配制。

取Na₂S·9H₂O 5克加水至100 毫升，在121 ℃ 蒸汽下灭菌15分钟．

（4）完全培养基：

基础培养基（融化冷至45 ℃ ）   10毫升

NaHCO₃溶液   0.4毫升

Na₂S·9H₂O    0.2 毫升

依次无菌地如到基础培养基中，混匀后可用。

2. 分离与纯化培养

（1）分离培养：在广口玻璃瓶底放一层0.5-1厘米厚的混有腐烂海藻的海泥，用海水覆盖，暴露于光下。直至培养器最靠近光源的壁上长出红色菌为止。这些红色生长物通常含有着色菌．它的生长决定于泥中硫酸盐的还原，和随后释放的H₂S 。

（2）纯化培养

① 深层试管法：

a 、选取具有着色菌特征的红色生长物（已用显微镜检查过细胞形态），放于一定量的完全培养液中，混匀。

b ．准备一系列深层融化的完全培养基管，并保存在45 ℃ 水溶中，将混匀于培养液中的生长物稀释成一系列稀释度。

c ．每支试管用经160 ℃ 灭菌1 小时的固体石蜡和液体石蜡1:1 的混合物覆盖，每管盖2 厘米高。

d ．曝光于25-28 ℃ 下培养，3-7 天后完全分开的红色菌落出现在较高的稀释度里。选择一支合适的试管培养物表面灭菌，切断玻璃，移去管子，然后在无菌的培养皿里，以无菌操作法把菌落解剖出来。

e. 在无菌的完全培养基里乳化菌落，并在一系列稀释度中重复以上操作培养，保证纯度。

纯培养物可在这些深层琼脂里保存，2 个月移种一次。

② 琼脂培养基划线法：将红色生长物在完全培养基平板上划线接种，于厌氧条件下曝光25-28℃，培养4-7天．挑出典型菌落，重新划线培养，直到纯化为止。纯化后可保存在深层完全培养基中．

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