1．分析目标化合物
    环酰菌胺
2．仪器设备
    带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪和液相色谱--质谱仪。
3．试剂

     10％磷酸溶液

     乙酸乙酯

      丙酮

     无水硫酸钠

     正己烷

     乙腈

     10％氯化钠溶液
4．标准品
    环酰菌胺：含环酰菌胺98％以上，熔点为153℃。
5．试验溶液的制备
a 提取方法
① 种子
    将样品粉碎，过420μm标准网筛后，称取其10.0g，加入20mL 10％磷酸溶液，放置2小时。
    加入100mL丙酮，搅拌3分钟后，用涂布1cm厚硅藻土滤纸抽滤到磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物，加入50mL丙酮，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。
    将其转移到预先加有100mL 5％氯化钠溶液的300mL分液漏斗中。用100mL乙酸乙酯洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗液于上述分液漏斗中。用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙酸乙酯层移入300mL三角瓶中。水层中加入50mL乙酸乙酯，按上述同样操作，合并乙酸乙酯层于上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时振荡、混合，放置15分钟后，滤入磨口减压浓缩瓶中。再用20mL乙酸乙酯洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，重复操作两次。合并两洗液于减压浓缩瓶中。40℃以下除去乙酸乙酯。
    残留物中加入30mL正己烷，转移到100mL分液漏斗中。加入30mL正己烷饱和乙腈，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙腈层移入磨口减压浓缩器中。正己烷层中再加入30mL正己烷饱和乙腈，按上述同样操作，重复操作2次，合并乙腈层于减压浓缩器中。40℃以下除去乙腈。残留物中加入乙酸乙酯：正己烷(3：17)混合溶液溶解，准确至1mL。
② 水果和蔬菜
    准确称取约1kg样品，必要时定量加入适量水，搅碎混合均匀后，称取相当于20.0g样品的量。
    加入30mL10％磷酸溶液和100mL丙酮，搅拌3分钟后，用涂布1cm厚硅藻土滤纸抽滤到磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物，加入50mL丙酮，搅拌3分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。
    将其转移到预先加有100mL10％氯化钠溶液的300mL分液漏斗中。用100mL乙酸乙酯洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗液于上述分液漏斗中。用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙酸乙酯层移入300mL三角瓶中。水层中加入50mL乙酸乙酯，按上述同样操作，合并乙酸乙酯层与上述三角瓶中。加入适量无水硫酸钠，不时振荡、混合，放置15分钟后，滤于磨口减压浓缩瓶中。再用20mL乙酸乙酯洗涤三角瓶，以此洗液洗涤滤纸上的残留物，重复操作两次。合并两洗液于减压浓缩瓶中。40℃以下除去乙酸乙酯。残留物中加入乙酸乙酯：正己烷(3：17)混合溶液溶解，准确至2mL。
b 净化方法
   丙烯酰胺共聚物结合丙三基甲硅烷基化硅胶小柱(360mg)中注入10mL丙酮，弃去流出液。再注入10mL正己烷，弃去流出液。柱中注入0.5mL a 提取方法所得的溶液后，注入10mL乙酸乙酯：正己烷(3：17)混合溶液，弃去流出液。再注入10mL丙酮：正己烷(1：1)混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去丙酮与正己烷。残留物中加入乙腈溶解，准确至0.5mL，此为试验溶液。
6．测定方法
a 定性试验
    按下列操作条件进行试验。试验结果应与标准品的一致。
    操作条件
    柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。
    柱：内径4.6mm，长150～250mm的不锈钢管。
    柱温：50℃。
    检测器：波长289nm。
    流动相：乙腈：0.4％磷酸二氢钠溶液(1：1)的混合溶液。调整流速使环酰菌胺约12分钟流出。
b 定量试验
    根据与a 定性试验相同操作条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法进行定量。
c 确证试验
    按照a 定性试验相同的操作条件，用液相色谱--质谱仪测定。试验结果应与标准品的一致。另外，必要时用峰高法或峰面积法进行定量。
7．定量限
    0.01mg/kg。
8．注意事项
    必须在小于pH3 的条件下进行提取。另外，进行确证试验时，可以采用气相色谱--质谱法。