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      出口食品中霍乱弧菌检验方法



      录入时间:2009-2-17 13:13:23 来源:青岛龙8生物

      一、培养基明细:
         名称                         规格                  价格(元)
      碱性蛋白胨水(APW)           250g                     70
      TCBS琼脂                      250g                     95
      三糖铁琼脂(TSI)             250g                     85
      双糖铁琼脂(KIA)             250g                     85
      T1N1琼脂                      250g                     85
      精氨酸葡萄糖斜面琼脂(AGS)   100g                     385
      Hugh-Leifson葡萄糖肉汤(HLGB)  *                       *
      MR-VP肉汤                     20支                     15
      ONPG胨水                      20支                     35
      Andrade氏糖类肉汤             250g                     80
      Andrade氏指示剂               100ml                    50
      氧化酶试剂                     1g                      50  
      粘丝试验溶液                    *                       *
      革兰氏染色液                   5ml*8                    40
      5%红细胞生理盐水                *                       *
      50万单位多黏菌素B纸片           *                       *
      10ug和150ugO/129纸片            *                       *
      霍乱弧菌诊断血清(O1群)       1ml*12                   480
      霍乱弧菌诊断血清(O139群)      1ml                     50
      二、备注:
      1、依据SN/T 1022—2001出口食品中霍乱弧菌检验方法 适用于出口水产品及其它食品的检验。
      2、术语:
         霍乱弧菌:为革兰氏阴性菌,菌体弯曲呈弧状或逗点状,菌体一端有单根鞭毛和菌毛,无荚膜与芽胞。经人工培养后,易失去弧形而呈杆状。细菌运动极为活泼,呈流星穿梭运动。营养要求不高,在PH8.8~9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一PH不易生长,故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形,光滑,透明。 
        霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐,靛基质反应阳性,当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中,产生靛基质与亚硝酸盐,在浓硫酸存在时,生成红色,称为霍乱红反应,但其他非致病性弧菌亦有此反应,故不能凭此鉴定霍乱弧菌。EL Tor型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同。前者Vp阳性而后者为阴性。前者能产生强烈的溶血素,溶解羊红细胞,在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环,古典型霍乱弧菌则不溶解羊红细胞。个别EL Tor型霍乱弧菌株亦不溶血。根据弧菌O抗原不同,分成Ⅵ个血清群,第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群A、B、C三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型:含AC者为原型(又称稻叶型),含AB者为异型(又称小川型),A、B、C均有者称中间型(彦岛型)。霍乱弧菌对热,干燥,日光,化学消毒剂和酸均很敏感,耐低温,耐碱。湿热55℃,15分钟,100℃,1~2分钟,水中加0.5ppm氯15分钟可被杀死。0.1%高锰酸钾浸泡蔬菜、水果可达到消毒目的。在正常胃酸中仅生存4分钟。
      3、粘丝试验溶液:溶解0.5g去氧胆酸钠于100ml水中,拧紧瓶盖保存于冰箱中,无需高压灭菌。霍乱弧菌在钙溶液中被乳化后,1min内形成粘液状团块。当粘块从玻片上被拉出2cm—3cm时呈粘丝。
      4、Hugh-Leifson葡萄糖肉汤(HLGB):
      配方:
      蛋白胨                 2.0g
      酵母浸粉               0.5g
      氯化钠                 30.0g
      葡萄糖                 10.0g
      溴甲酚紫               0.015g
      琼脂                    3.0g
      蒸馏水                 1000ml
      制法:将各成分(溴甲酚紫除外)加入蒸馏水中,充分混匀,搅拌加热溶解调节pH7.4,加入溴甲酚紫,混匀,分装于15mm*150mm试管的1/3容量,121℃高压灭菌15min。接种后覆盖约1ml灭菌矿物油以检查葡萄糖发酵。   
         

       

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