一、用途：

  添加萘啶酮酸，吖啶黄素即为LB1，LB2，用于李斯特氏菌二步增菌(GB4789.28-2013，GB 4789.30-2016)。

二、实验原理：

  胰胨、多价胨和酵母膏提供氮源、维生素和生长因子；李斯特氏菌可耐受较高含量的氯化钠；磷酸二氢钾和磷酸氢二钠为缓冲剂；七叶苷为可发酵的糖类；萘啶酮酸和吖啶黄为选择性抑菌剂，抑制非李斯特氏菌的生长。

三、培养基配方（g/L）：

此配方可以进行改良或增加营养成分以获得最佳的结果

四、试验方法：

  1、称取本品49.4g， 加热搅拌溶解于 1000ml蒸馏水中，分装， 121℃高压灭菌15分钟，备用。

    LB1液：每225ml培养基中加入1支萘啶酮酸（5.0mg/支）和1支吖啶黄素（3.0mg/支）；

    LB2液：每200ml培养基中加入1支萘啶酮酸（4.0mg/支）和1支吖啶黄素（5.0mg/支）。

  2、制备质控菌液。

  3、混合菌的接种

  在装有待测培养基的试管中接种10-100CFU的目标菌，并接种1000-5000CFU的非目标菌，接种总量1ml，同时接种两个平行管，混匀。同时分别将目标菌菌悬液（与试管接种同一稀释度）和非目标菌菌悬液（比试管接种小10-100倍稀释度）1ml倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用，30±1℃培养18-24小时。

  4、非目标菌接种

  在装有待测培养基的试管中接种1000-5000CFU的非目标菌，接种量1ml，同时接种两个平行管，混匀，30±1℃培养18-24小时。

  5、培养液的接种

  5.1混合菌培养液的接种

  用10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液，换线接种到PALCAM上，每管接种一个平板，36±1℃培养24-48小时。

  5.2非目标菌培养液的接种

  吸取10μL经培养后的非目标菌培养液，均匀涂布接种到TSA上，每管接种一个平板。也可使用倾注法进行接种，36±1℃培养18-24小时。

  6、记录实验结果

  目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU，则表示待测液提培养基的生长率良好；非目标菌在非选择性平板上的菌落<100CFU，则表示待测液体培养基的选择性为良好。

五、结果观察与解释：

  接种以下质控菌株，在30±1℃培养18-24小时：

质控菌株	菌株编号	接种量 （CFU）	方法	质控结果	其他特征
单增李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 粪肠球菌	ATCC19115 ATCC25922 ATCC29212	10-100 1000-5000 1000-5000	半定量	在PALCAM上＞10CFU	灰色至黑色菌落，带有黑色晕环
大肠埃希氏菌	ATCC25922	1000-5000		在TSA上＜100CFU	/
粪肠球菌	ATCC29212	1000-5000		在TSA上＜100CFU	/

图1-2 李氏菌增菌肉汤（LB2）微生物质控结果

备注：a：单增李斯特氏菌，b：大肠埃希氏菌，c：粪肠球菌，d：空白对照

六、注意事项：

  本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。

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相关标准：

GB 4789.30-2016 单核细胞增生李斯特氏菌检验 点击下载

GB 4789.28-2013 培养基和试剂的质量要求 点击下载

注:本文属龙8生物原创,未经允许不得转载。

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