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        霍乱双糖铁琼脂实验原理及现象

        杨小洁
        录入时间:2020-12-4 10:51:58 来源:青岛龙8生物

        一、实验原理:


         本培养基用于霍乱弧菌的生化试验(SN标准)

          

         牛肉粉、酵母粉、月示蛋白胨、蛋白胨提供氮源、维生素和矿物质,乳糖、葡萄糖是可发酵的糖,氯化钠维持均衡的渗透压,琼脂是培养基的凝固剂。


        二、培养基配方(g/L):


        成分

        用量

        牛肉粉

        3.0

        酵母粉

        3.0

        月示蛋白胨

        15.0

        蛋白胨

        5.0

        乳糖

        5.0

        葡萄糖

        1.0

        硫酸亚铁

        0.2

        氯化钠

        20.0

        硫代硫酸钠

        0.3

        琼脂

        12.0

        酚红

        0.024

        pH7.2-7.6
        25℃


        三、实验方法:



         称取本品 64.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装于试管内的 3/4 左右高度,121℃高压灭菌 15 分钟,放置高层斜面备用。


        四、结果观察与解释

         

         按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。 

        质控菌株

        菌株编号

        接种量(CFU)

        生长情况

        其它特征

        霍乱弧菌非01群

        HB081127A-1

        /

        +++

        K/A,H2S(-),产气(-)

        副溶血性弧菌

        ATCC17802

        /

        +++

        K/A,H2S(-),产气(-)

        溶藻弧菌

        ATCC17749

        /

        +++

        K/A,H2S(-),产气(-)

        大肠埃希氏菌

        ATCC25922

        /

        +++

        A/A,H2S(-),产气(+)

        鼠伤寒沙门氏菌

        ATCC14028

        /

        +++

        K/A,H2S(+),产气(+)

        普通变形杆菌

        ATCC13315

        /

        +++

        K/A,H2S(+),产气(+)


          

         实验结果现象与说明:

         1.霍乱弧菌非01群、副溶血性弧菌、溶藻弧菌

         斜面红/底层黄:发酵葡萄糖但不发酵乳糖,是不发酵乳糖的特征的菌类。

         2.大肠埃希氏菌

         斜面黄/底层黄:既发酵乳糖也发酵葡萄糖,产生大量的酸使整个培养基呈黄色,同时有产气现象。

         3.鼠伤寒沙门氏菌、普通变形杆菌

         斜面红/底层黄(部分区域黑色):发酵葡萄糖但不发酵乳糖同时产生硫化氢,是产硫化氢不发酵乳糖特征。

         硫化氢的产生:这类菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应生成黑色的硫化亚铁沉淀。


        五、注意事项


         能产生硫化氢的菌应及时观察试验结果,以免生成的硫化铁形成黑色区域,遮盖斜面与底层的颜色影响判断结果。


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         注:本文属龙8生物原创,未经允许不得转载。

         

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